'Иммуногистохимическое исследование

Иммуногистохимическое исследование

0 комментов
просмотров
16 мин. на чтение

Интерпретация результатов анализа

Необходимо иметь в виду, что исследовать подготовленные образцы тканей имеет право только врач, имеющий сертификат, подтверждающий специальную подготовку по проведению анализов по методу ИГХ.

В заключении должно быть указано:

  1. Показатели антител, к которым определена тропность исследуемой ткани.
  2. Указывается разновидность раковых клеток и их количество.
  3. Указываются выявленные антигены, которые помогают установить вид онкологии.

По результатам исследования нельзя ставить окончательный диагноз. Врач-онколог имеет право это сделать только после получения интерпретации всех диагностических процедур.

Таким образом, можно сделать вывод, что эффективно иммуногистохимическое исследование при раке молочной или других желез и других видах онкологии. Анализ дает исчерпывающую информацию и позволяет распознать начинающийся патологический процесс на клеточном уровне.

Иммуногистохимия – это методика выявления наличия онкологического процесса в организме посредствам оценки содержания антигенов. С ее помощью можно не только диагностировать раковое заболевание на ранней стадии, но и спрогнозировать дальнейшее течение. Используется в качестве диагностики рака и оценки эффективности выбранного метода лечения

При наличии в организме онкологического процесса, в кровь попадают антигены. Их наличие указывает на патологию, а конкретный тип на место локализации новообразования. С его помощью можно более точно поставить диагноз и определиться с эффективностью лечения.

Суть исследования заключается в выявлении антигенов, что возможно посредствам проведения ряда тестов. Используются реактивы, в состав которых входят «меченые» антитела. Эти белковые структуры имеют определенный цвет, который придают им специализированные красители.

Антитела способны выискивать антигены и вступать с ними в связи. Подобная реакция называется «антиген-антитело», когда с помощью меченых клеток удается определить наличие антигенов, указывающих на наличие злокачественного опухолевого процесса.

С помощью иммуногистохимического исследования можно выявить не только наличие онкогенных маркеров, но и определить некоторые рецепторы к гормонам, что эффективно при гормонозависящем типе опухоли или прогрессирующих эндокринных заболеваниях.

Результаты исследования показывают:

  1. Гистологическую принадлежность опухоли, что подтверждает или опровергает наличие рака.
  2. Локализацию опухолевого процесса и органы-мишени, которые в дальнейшем пострадают – это позволяет максимально направить все методы лечения на подавление патологического процесса именно в конкретном участке тела.
  3. Возможную методику лечения и резистентность клеток к определенным видам медикаментов. Врач может прогнозировать, насколько эффективным будет тот или иной препарат для конкретного пациента. Это минимизирует риски развития побочных воздействий и отсутствие терапевтического эффекта.

Иммуногистохимия является самым достоверным исследованием, которое помогает определить тип раковых клеток. Уровень погрешности минимален, что указывает на высокую точность результатов.

Иммуногистохимия очень точно определяет тип раковых клеток

Неоспоримым преимуществом иммуногистохимии является точное выявление типа рака и места его локализации (очага). Выявить это никакими другими сверхточными методиками невозможно. Именно окрашивание образца биоматериала показывает, какие клетки имеются в опухоли, как они себя ведут, и как будет вести себя при воздействии на них определенных способов лечения.

Диагностика, основанная на химической реакции, помогает выявить опухолевый процесс на самых ранних стадиях. Это увеличивает шансы на благоприятный исход.

На точность результатов влияют некоторые внешние факторы, в том числе и прием гормональных препаратов. За несколько дней до проведения биопсии показан отказ от всех лекарств, диета и отсутствие физических нагрузок. Невыполнение этих рекомендаций увеличивает риск появления неточностей в результатах исследования. При желании анализ можно сдавать в двух лабораториях одновременно, что снизит вероятность погрешности.

Ручной метод ИГХ

Ручной метод ИГХ – дает возможность проводить температурную демаскировку антигенов, что позволяет качественно и оперативно производить раскрытие антигенов, делать их легкодоступными для антител в процессе проведения ИГХ окрашивания. Decloaking Chamber Plus, водяная баня GFL и слайд-мастер позволяют решать множество задач, в частности:

  • Возможность работы с различного рода образцами срезов.
  • Минимальной стоимости проведения исследований, за счет точной дозировки микрокапель реагента.

Применение ручного метода ИГХ обеспечивает идеальные условия для проведения иммуногистохимии и высочайший уровень стандартизации.

Первичные антитела

Иммуногистохимия (ИГХ) – метод исследования тканей с целью выявления белков с помощью специфической реакции антиген-антитело. Метод позволяет диагностировать опухоли, устанавливать их нозологический вариант, выявлять по метастазам первичный опухолевый очаг, обнаруживать злокачественную трансформацию клеток, делать прогноз относительно течения опухолевого заболевания и возможностей таргетной терапии опухоли, а также выявлять наличие резистентности клеток опухоли к лучевой терапии и химическим препаратам.

Компания БиоВитрум осуществляет поставки современного оборудования и расходных материалов для проведения широкого спектра иммуногистохимических исследований, в ходе которых используются:

Автоматизированные системы с высокой пропускной способностью – иммуностейнеры серии BenchMark (ULTRA, XT, GX). Системы предназначены для проведения иммуногистохимических окрасок и гибридизации in situ. Позволяют выполнять все этапы этих процедур в полностью автоматическом режиме, что полностью исключает влияние человеческого фактора на результат окрашивания и, следовательно, на диагноз пациента.

Первичные кроличьи и мышиные моноклональные и поликлональные антитела (всего более 8000 наименований) производства ROCHE, CellMarque, SpringBioscience и других ведущих мировых производителей, предназначенные для проведения диагностики in vitro и научных исследований в автоматическом и в ручном режиме.

Наборы для визуализации (системы детекции). Так как визуализация антигена в ходе иммуногистохимического исследования сегодня производится преимущественно с помощью безбиотинных мультимерных и полимерных систем детекции, дающих наиболее качественный и контрастный результат, компания БиоВитрум рекомендует использовать наборы REVEAL, производства SpringBioscience, США.

Контрольные блоки TissueFocus для оценки качества окраски образцов. В наличии коллекция из более чем 140000 образцов тканей человека с данными о каждом доноре.

Дополнительное и вспомогательное оборудование, в том числе механические дозаторы SARTORIUS-BioHit (Финляндия), водяные бани и аппараты для высокотемпературной демаскировки антигенов, планшеты для ручного иммуногистохимического окрашивания.

Прочие расходные материалы: дезинфицирующие и блокирующие растворы, растворы для демаскировки, буферы для промывки, иммуногистохимические карандаши и предметные стекла с адгезивным покрытием.

Применение в онкологии

При обнаружении онкологических заболеваний метод иммуногистохимического анализа

  1. Гистогенетическая диагностика опухолей (проведение биопсии).
  2. Определяет тип новообразования.
  3. Выявляет метастазы и первичную опухоль.
  4. Определяет прогноз развития заболевания.
  5. Злокачественная трансформация клеток.
  6. Возможность применения таргетной терапии.
  7. Резистентность и чувствительность опухолевых клеток к химическим препаратам и лучевой терапии.

Метод иммуногистохимического анализа для определения первичных опухолей и метастаз использует большое количество различных маркеров, что позволяет наиболее точно диагностировать заболевание и ход его развития. На основе ИГХ-анализа врач онколог получает заключение с положительными и отрицательными маркерами.  Поэтому, иммуногистохимический анализ помогает подтвердить или опровергнуть гипотезу других клинико-лабораторных исследований.

Для патологоанатома ИХГ-анализ позволяет выявить причинно-следственную связь.

Рис. 3. Иммуногистохимический анализ виментин+положительных новообразований. Гистологическое исследование

Если бесплодие

Бесплодие — огромная проблема для многих современных семей. Проведенные научными медицинскими учреждениями исследования показали, что в достаточно большом количестве случаев бесплодие бывает обусловлено недостатком гормонального фона эндометрия — эпителиального слоя, выстилающего полость матки. Именно герцепт-статус и позволяет выявить ИГХ-исследование рецептивности эндометрия. Женские половые гормоны — активные участки процесса формирования яйцеклетки, ее оплодотворения, имплантации эмбриона в полость матки, а также последующего вынашивания беременности и родов. ИХГ-исследование эндометрия, как мы уже сказали, позволяет выявить герцепт-статус клеток эндометрия к эстрогену и прогестерону и в соответствии с полученными результатами подобрать для женщины правильное лечение.

Типовая маркировка

Типы антитела

Антитела, используемые для определенного обнаружения, могут быть полклональными или моноклональными. Полклональные антитела сделаны, введя животных с белком интереса или фрагмент пептида и, после того, как вторичная иммунная реакция будет стимулироваться, изолируя антитела от целой сыворотки. Таким образом полклональные антитела — разнородное соединение антител, которые признают несколько антигенных детерминант. Моноклональные антитела показывают специфику для единственной антигенной детерминанты.

Для стратегий обнаружения IHC антитела классифицированы как первичные или вторичные реактивы. Основные антитела подняты против антигена интереса и как правило не спрягаются (немаркированные), в то время как вторичные антитела подняты против иммуноглобулинов основных разновидностей антитела. Вторичное антитело обычно спрягается к молекуле компоновщика, такой как биотин, который тогда принимает на работу молекулы репортера, или само вторичное антитело непосредственно связано с молекулой репортера.

Репортеры IHC

Молекулы репортера варьируются основанный на природе метода обнаружения, самое популярное хромогенное существо и обнаружение флюоресценции, установленное ферментом или fluorophore, соответственно. С хромогенными репортерами марка фермента реагируется с основанием, чтобы привести к сильно цветному продукту, который может быть проанализирован с обычным оптическим микроскопом. В то время как список оснований фермента — обширная, щелочная фосфатаза (AP), и пероксидаза хрена (HRP) эти два фермента, используемые наиболее экстенсивно в качестве этикеток для обнаружения белка. Множество хромогенных, fluorogenic и хемилюминесцентных оснований доступно для использования или с ферментом, включая ПРИКОСНОВЕНИЕ или с BCIP/NBT, которые производят коричневое или фиолетовое окрашивание, соответственно, везде, где ферменты связаны.

Целевые методы обнаружения антигена

Прямой метод — красящий метод одного шага и включает маркированное антитело (например, FITC-спрягаемая антисыворотка) реагирующий непосредственно с антигеном в секциях ткани. В то время как эта техника использует только одно антитело и поэтому проста и быстра, чувствительность ниже должна мало сигнализировать об увеличении, в отличие от косвенных подходов. Однако эта стратегия используется менее часто, чем ее многофазный коллега.

Косвенный метод включает немаркированное основное антитело (первый слой), который связывает с целевым антигеном в ткани и маркированном вторичном антителе (второй слой), который реагирует с основным антителом. Как упомянуто выше, вторичное антитело должно быть поднято против IgG вида животных, в котором было поднято основное антитело. Этот метод более чувствителен, чем прямые стратегии обнаружения из-за увеличения сигнала из-за закрепления нескольких вторичных антител к каждому основному антителу, если вторичное антитело спрягается флуоресцентному репортеру или репортеру фермента.

Дальнейшее увеличение может быть достигнуто, если вторичное антитело спрягается к нескольким молекулам биотина, которые могут принять на работу комплексы avidin-, streptavidin-или NeutrAvidin направляющийся белком фермент. Различие между этими тремя связывающими белками биотина — их отдельная обязательная близость к эндогенным целям ткани, приводящим к неопределенному закреплению и высокому фону; ранжирование этих белков, основанных на их неопределенных обязательных сходствах, от самого высокого до самого низкого: 1) avidin, 2) streptavidin и 3) белок NeutrAvidin.

косвенного метода, кроме его большей чувствительности, также есть преимущество, что только относительно небольшое количество спрягаемого стандарта (маркировало) вторичные антитела, должен быть произведен. Например, маркированное вторичное антитело подняло против кролика IgG, который может быть куплен «с полки», полезно с любым основным антителом, поднятым у кролика. С прямым методом было бы необходимо маркировать каждое основное антитело для каждого антигена интереса.

Вещества для контрастирующего окрашивания

После иммуногистохимического окрашивания целевого антигена вторая окраска часто применяется, чтобы обеспечить контраст, который помогает основной окраске выделиться. Многие из этих окрасок показывают специфику для определенных классов биомолекул, в то время как другие окрасят целую клетку. И хромогенные и флуоресцентные краски доступны для IHC, чтобы обеспечить обширное множество реактивов, чтобы соответствовать каждому экспериментальному плану и включать: hematoxylin, окраска Hoechst и DAPI обычно используются.

ПОКАЗАНИЯ К ПРОВЕДЕНИЮ ИГХ

  • Дифференциальная диагностика опухолей;
  • Определение источника метастаза при неясном первичном очаге;
  • Оценка гормонального статуса;
  • Иммунофенотипирование опухолей;
  • Определение факторов прогноза опухолевого процесса;
  • Выбор схемы противоопухолевой терапии.

Также этот анализ эффективен при проблемах с зачатием. Сделать иммуногистохимию эндометрия показано и полезно при следующих гинекологических заболеваниях и состояниях:

• бесплодии;
• заболеваниях матки;
• наличии патологий в органах репродуктивной системы;
• невынашивании беременности;
• неудачные попытки ЭКО;
• хронических заболеваниях эндометрия.

ИММУНОГИСТОХИМИЯ ПРИ РАКЕ

По данным медицинской статистики, в 5-15% случаев злокачественные опухоли обнаруживаются метастазами. Метастазы без выявленного первичного очага характеризуются случайной, нетипичной локализацией и быстрым нарастанием процесса. Средняя продолжительность жизни пациентов с неясным первичным очагом и с тремя и более метастатическими зонами поражения составляет несколько месяцев. Своевременная ИГХ-диагностика определяет тактику лечения до выяснения первичного очага. Иммуногистохимический анализ, в зависимости от морфологического типа новообразования, позволяет уточнить клеточное строение опухоли и/или определить вероятную локализацию очага.

Для диагностики первичных опухолей и их метастазов используется широкий спектр маркеров. Определение направления роста опухолевых клеток и ряда биологических параметров опухоли само по себе является показанием для назначения определенных схем терапии. Сделать иммуногистохимию рака молочной железы или образца ткани другой локализации можно по направлению врача онколога, ведь диапазон значений индивидуален, зависит от анамнеза, проведенного или планируемого лечения и предполагаемого / клинического диагноза.


 

НЕОБХОДИМО СДЕЛАТЬ ПУНКЦИЮ ИЛИ БИОПСИЮ ОБРАЗОВАНИЯ?
Узнайте подробности, как сделать Кор-биопсию молочной железы…

СТОИМОСТЬ УСЛУГ

Цены на иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы представлены в таблице ниже. На сегодняшний день в распоряжении специалистов, осуществляющих ИГХ-тесты, имеются практически все антитела к различным видам опухолей, что служит залогом получения достоверных результатов. Набор и количество необходимых для сдачи анализов на иммуногистохимию будет зависеть от нескольких факторов. Прежде всего, нужно учитывать локализацию образования и результаты гистологии полученного при биопсии материла. Всю необходимую информацию Вам предоставить ваш лечащий врач.

Сроки готовности анализа ИГХ: 7-10 дней.

Иммуногистохимия Цена
Определение статуса гена HER2 и Chr 17 (CISH) 14 000
Иммуногистохимия Ki-67 6 500
Рецепторы к эстрогенам и прогестерону (2 антитела) ЭР, ПР 8 500
Иммуногистохимия (3 антитела) Ki-67, ЭР, ПР 12 000
Иммуногистохимия (3 антитела+1) Ki-67, ЭР, ПР + HER2/neu 17 500
 

 

5.1. Почему необходимо демаскирование антигенов?

   В процессе фиксации тканевые антигены претерпевают конформационные изменения, связанные с коагуляцией белков и образованием перекрестных сшивок при воздействии альдегидов (формальдегида и глутарового альдегида) (Fraenkel-Conrat H. , 1947; 1948). Эти изменения во многих случаях приводят к маскировке антигенных детерминант, с которыми должны взаимодействовать полученные антитела к данным белкам. В результате оказывается, что при постановке иммуногистохимических реакций на фиксированном материале часть антител проявляет недостаточно высокую активность и окрашивание конечного продукта реакции слишком слабое либо вообще отсутствует. Степень повреждения антигенов зависит от условий фиксации и концентрации альдегидов в фиксирующей жидкости. Считается, что коагулирующие фиксаторы (спирты, уксусная кислота, соли металлов) вызывают меньшую потерю антигенных свойств, чем формальдегид. Хуже всего идут иммуноцитохимические реакции на препаратах, фиксированных глутаральдегидом.

   Долгое время эта ситуация создавала неразрешимую проблему для использования в иммуногистохимической диагностике материала, фиксированного в формалине и залитого в парафин – стандартный патологоанатомический материал. При необходимости иммуногистохимического исследования приходилось использовать замороженный нефиксированный материал или методы мягкой фиксации (холодный ацетон и др.). В настоящее время решение найдено. Восстановить антигенные детерминанты, которые были изменены при взаимодействии с формальдегидом, в большинстве случаев позволяет высокотемпературная обработка срезов в водных буферных растворах (Shi S. R. , 1991). Этот метод получил название «тепловое демаскирование антигенов». В англоязычной литературе он обычно называется heat-induced epitope retrieval. Следует отметить, что теоретические основы этого метода пока не разработаны. До сих пор непонятно, почему обработка материала при температуре свыше 100 °C приводит к восстановлению антигенных свойств белков, а не к их денатурации и дальнейшему разрушению антигенных детерминант. Тем не менее многочисленные исследования показывают высокую эффективность процедуры теплового демаскирования (Taylor C. R. , 1996; Evers P. , 1998; Kоржевский Д. Э. , 2005; Сухорукова Е. Г. , 2012). Причем метод оказался пригоден не только для парафиновых срезов, но и для материала, залитого в целлоидин (Shi S. R. , 1992a; 1992b; 1993), и даже для срезов, полученных с блоков, залитых в эпоксидные смолы.

   В настоящее время разработано множество модификаций способа теплового демаскирования антигенов. Общим для них является прогрев срезов, приклеенных к предметным стеклам, в водных растворах до температуры 95 – 100 °C, а в отдельных случаях – и до 120 °C при повышенном давлении.

Методика проведения

Исследование проходит в четыре этапа:

  1. Долабораторная подготовка образца – получение нужного образца осуществляют с помощью биопсии. Выбор метода зависит от места локализации опухоли, ее формы и распространенности опухолевого процесса. Часть иссеченных тканей помещают в раствор формалина, после чего образец передают в лабораторию. Еще одним преимуществом иммуногистохимии является возможность исследования через определенное время. Нет необходимости обрабатывать образец сразу, как только произведена биопсия. Образцы хорошо хранятся и показывают результаты не хуже, чем в день их забора.
  2. Подготовка образца к исследованию – биоматериал вводят в парафин, что необходимо для полной фиксации образца. Из полученных элементов тканей готовят тончайшие срезы, что возможно с помощью высокоточного оборудования. Чем тоньше срез, тем проще проследить химическую реакцию. Срезы укладывают на специальную панель, на которую в дальнейшем будет наноситься реагент.
  3. Окрашивание срезов посредствам введения антигенов – готовят несколько образцов, на которые воздействуют различными антителами. Полученный результат фиксируют по степени окрашенности конкретного участка среза. Одновременно можно выявлять до 10 типов антигенов, что позволяет установить точную природу опухоли.
  4. Оценка результатов – по истечению определенного времени (7-10 дней) с помощью высокоточного оборудования оценивают степень окраски образцов, делая заключение. Все полученные данные вносят в специальный бланк-расшифровку, который помогает при постановке точного диагноза. Его передают лечащему врачу, после чего подбирается соответствующее лечение.

Иммуногистохимия проходит в 4 этапа

Забор биоматериала осуществляют до начала лечения, чтобы оценить истинное положение вещей. Если использовались медикаменты, данные результатов будут несколько отличаться от истинных.

Для исследования используют часть биоматериала. Вторая часть может храниться в лаборатории. Это позволит снизить количество вмешательств в организм, особенно при выборе метода лечения. Нет необходимости сдавать биопсию повторно, чтобы установить, какой именно медикамент будет эффективен в той или иной ситуации.

Преимущество отдают тем лабораториям, в которых окрашивание образцов осуществляется автоматически. Минимизация человеческого вмешательства в процесс позволяет получать наиболее точные результаты.

Типовая подготовка

Подготовка образца важна, чтобы поддержать морфологию клетки, архитектуру ткани и antigenicity целевых антигенных детерминант. Это требует надлежащей коллекции ткани, фиксации и секционирования. Решение параформальдегида часто используется, чтобы фиксировать ткань, но другие методы могут использоваться. Ткань может тогда нарезаться или использоваться целая, зависящая от цели эксперимента или самой ткани. Перед секционированием образец ткани может быть включен в среду, как твердый парафин или cryomedia. Секции могут быть нарезаны на множестве инструментов, обычно микротом или криостат, и нарезаны в диапазоне 4-40 μm. Части тогда установлены на слайдах, обезводили мытье алкоголя использования увеличивающихся концентраций (например, 50%, 75%, 90%, 95%, 100%), и очистили использование моющего средства как ксилол перед стать изображенным под микроскопом.

Зависящий от метода фиксации и сохранения ткани, образец может потребовать, чтобы дополнительные шаги сделали антигенные детерминанты доступными для закрепления антитела, включая поиск антигена и deparaffinization. Для фиксированных формалином включенных в керосин тканей поиск антигена часто необходим, и связал предварительное рассмотрение секций с высокой температурой или протеазой. Эти шаги могут иметь значение между целевым окрашиванием антигенов или не окрашиванием.

Зависящий от типа ткани и метода обнаружения антигена, эндогенный биотин или ферменты, возможно, должны быть заблокированы или подавлены, соответственно, до окрашивания антитела.

Хотя антитела показывают предпочтительную алчность для определенных антигенных детерминант, они могут частично или слабо связать с местами на неопределенных белках (также названный реактивными местами), которые подобны родственным связывающим участкам на целевом антигене. Большое количество неопределенных обязательных причин высокое окрашивание фона, которое замаскирует обнаружение целевого антигена. Чтобы уменьшить окрашивание фона в IHC, ICC и других immunostaining методах, образцы выведены с буфером, который блокирует реактивные сайты, с которыми первичные или вторичные антитела могут иначе связать. Общие буфера блокирования включают нормальную сыворотку, обезжиренное сухое молоко, BSA или желатин. Коммерческие буфера блокирования с составляющими собственность формулировками доступны для большей эффективности. Методы, чтобы устранить второстепенное окрашивание включают растворение основных или вторичных антител, изменяя время или температуру инкубации, и используя различную систему обнаружения или различное основное антитело. Контроль качества должен как минимум включать ткань, которая, как известно, выражала антиген как надежное управление и отрицательные средства управления ткани, которая, как известно, не выражала антиген, а также испытательную ткань, исследованную таким же образом с упущением основного антитела (или лучше, поглощение основного антитела).

Автоматизированный метод ИГХ

Автоматизированный метод ИГХ, проводимый на иммуностейнерах BenchMark, дает возможность:

  • оценивать биологический потенциал опухолевой клетки – прогноз течения опухолевых процессов, темп роста, реакцию на гормональную и химиотерапию;
  • достоверно оценивать фенотип опухоли, что позволяет избежать более продолжительных по времени и дорогостоящих диагностических мероприятий.

Применение иммуностейнера BenchMark ULTRA и BenchMark XT – это возможность проводить важные методики для прогноза и выбора тактик лечения:

  • экспрессию протоонкогенов в клетках рака молочных желез;
  • выявление гистогенетической принадлежности неклассифицируемых новообразований, определение биологического потенциала опухолей;
  • выявление рецепторов стероидных гормонов;
  • иммунодиагностика ходжкинских и неходжкинских линфом.

Использование уникальных запатентованных систем:

  • гарантирует воспроизводимость и качество исследований;
  • дает возможность установить тканевую или даже органическую принадлежность новообразования, что в свою очередь позволяет опровергнуть или доказать метастатический характер опухоли;
  • дает возможность проводить исследование без присутствия пациента (необходимы только стекла гистологических препаратов и парафиновые блоки).

Что выявляет

Главная цель проведения ИГХ – выявление причин бесплодия, но в ходе исследования нередко обнаруживают различные изменения в эндометрии. По этой причине анализ назначается в случае подозрения на хронический эндометрит, не сопровождающийся характерной симптоматикой.

При получении результатов удается выявить такие нарушения, как:

  • неполная трансформация маточного слоя;
  • развитие эндометрита;
  • нарушение фаз развития эндометрия;
  • гиперплазия.

Процедура подразумевает выскабливание полости матки. После этого полученный биоматериал тщательнейшим образом исследуется. Кроме того, удается высчитать промежуток времени, когда отмечается точное соответствие маточного слоя и эмбриона. В норме этот период наступает с 20–24-х суток цикла.

Оцените статью
Понравилась статья?
Комментарии (0)
Комментариев нет, будьте первым кто его оставит
Добавить комментарий
Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *